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技術文章

人肝內膽管癌細胞STR鑒定標準操作流程與結果解讀指南

更新更新時間:2026-02-06 瀏覽次數:225

  一、標準操作流程
  樣本準備:從人肝內膽管癌細胞系中提取基因組DNA,確保樣本具有代表性且細胞數量充足。DNA提取可使用商用試劑盒或傳統有機溶劑法,提取后需檢測DNA濃度和純度,以滿足后續檢測要求。
  STR位點擴增:選取人類基因組中高度多態性的13-24個STR位點,如TH01、TPOX、vWA等,使用特異性引物和PCR技術擴增這些位點。引物通常標記熒光,便于后續檢測。
  電泳分離與檢測:將PCR擴增產物進行毛細管電泳分離,利用熒光檢測系統(如ABI3500遺傳分析儀)檢測電泳分離后的STR片段長度,生成電泳圖譜。
  數據分析:根據電泳圖譜分析各STR位點的等位基因(片段長度),生成細胞系的STR基因型。將獲得的STR基因型與已知細胞系的STR數據庫(如ATCC、DSMZ等)進行比對,確認細胞系身份或檢測是否存在交叉污染。
  二、結果解讀指南
  匹配度判定:若受檢細胞STR位點的基因分型數據與其對應的標準細胞系匹配度≥80%,則判定為標準細胞系或其衍生細胞系;若匹配度在56%-80%之間,需結合細胞系形態、特異性標記物等輔助分析進行綜合判斷;若匹配度≤56%,則判定與其對應的標準細胞系不相關。
  多等位基因分析:人源細胞STR圖譜上,一個基因位點通常只出現1個或2個峰(純合或雜合)。若出現3個及以上峰,可能提示存在同源物種交叉污染或三倍體等多倍體突變現象。
  交叉污染檢測:通過比對多個細胞樣本的STR基因型,可檢測是否存在細胞系間的交叉污染。若檢測到混合樣本中的不同STR基因型,則確認存在多種細胞來源。

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